有關(guān)實(shí)驗(yàn)中影響ELISA標(biāo)本的內(nèi)源性物質(zhì)詳解

血清是常用的ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，影響的內(nèi)源性物質(zhì)具體講解如下：
首先有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，它可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。然而常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。因此我們根據(jù)這幾種物質(zhì)來(lái)詳細(xì)解說(shuō)下：
1、類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。解決該情況的辦法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測(cè)抗原時(shí)，可以用2 - 巰基乙醇等加入到標(biāo)本 稀釋液中，使RF降解。
2、補(bǔ)體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q 可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
3、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig ( s ) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng) 物Ig ( s ) ，但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。
4、嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
5、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體 內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig ( s )抗體。這些病人ELISA測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的辦法是：測(cè)定抗原時(shí)，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ，從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。
6、交叉反應(yīng)物質(zhì)
類de高辛、類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí) ，假如交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
7、標(biāo)本中其它成分的影響
血清脂質(zhì)過高、血紅蛋白及粘度過大等，均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。